貨號： HG-BS001

產(chǎn)品簡介：

BSA ELISA檢測試劑盒用于檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中BSA的殘留含量。 

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)測定樣品中BSA的殘留量。用捕獲抗體包被96孔酶標(biāo)板，制成固相抗體，隨后加入標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣品，再加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的標(biāo)記抗體，形成一個(gè)固相抗體-BSA-酶標(biāo)抗體的三明治結(jié)合物，反應(yīng)結(jié)束后洗滌，然后加入底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，底物在HRP的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在終止液的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測樣品中BSA的含量。

規(guī)格：

96 T

應(yīng)用：

適用于生物制品純化工藝過程的優(yōu)化、中間工藝過程的雜質(zhì)控制以及終產(chǎn)品的放行檢測

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品儲存條件與有限期：

未開封的試劑盒， 2-8℃條件下有效期為12個(gè)月。

本試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：

1. 酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板恒溫振蕩器或恒溫培養(yǎng)箱、洗板機(jī)（不與其他項(xiàng)目交叉使用）。 

2. 高精度移液器及一次性吸頭（0.5-10µL、 10-100µL、 30-300µL、 100-1000µL）。 

3. 去離子水、吸水紙、 EP管

試劑準(zhǔn)備：

1.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)盡量不放置電子天平或不稱量BSA粉末，實(shí)驗(yàn)前清潔實(shí)驗(yàn)臺面。

2. 1×Buffer 配制：取Buffer （20×） 1份，加19份去離子水配制成工作濃度Buffer （1×）。 Buffer （20×）中如果有結(jié)晶形成，應(yīng)置于室溫或37℃水浴輕輕搖晃，待結(jié)晶完i全溶解后再進(jìn)行稀釋。未用完的Buffer （20×）應(yīng)置于2-8℃儲存。

注：按需進(jìn)行配制，使用潔凈的專用容器，不與其他項(xiàng)目共用的溶液、容器及耗材。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品的配制：用1×Buffer將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至50ng/mL，然后用2倍倍比稀釋的方法配制標(biāo)準(zhǔn)品，如上圖： 

4.1× 酶標(biāo)抗體配制：冰箱中取出1250×酶標(biāo)抗體放于冰盒上，根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量（100μL/孔），用1×Buffer將1250×酶標(biāo)抗體稀釋1250倍即為1×酶標(biāo)抗體。 1250×酶標(biāo)抗體不要長時(shí)間處于室溫下，最好是用時(shí)拿出，并在冰盒上操作； 1×酶標(biāo)抗體需現(xiàn)配現(xiàn)用。 

5. 底物液的配制：使用前i10分鐘將顯色液A、顯色液B等體積混合，避光。確保底物液不被污染，如混合后的底物液已經(jīng)變藍(lán)，請勿使用。

實(shí)驗(yàn)流程：

1. 將試劑盒各組分恢復(fù)室溫（18~25℃）30min，從已平衡至室溫的鋁箔袋中取出試驗(yàn)所需板條，用記號筆標(biāo)記板條順序，剩余板條用封板膜封板后重新放回鋁箔袋中，封好，置于2-8℃保存。
2. 樣品溫育：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔按順序加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔加入1×Buffer，樣本孔中加入待測樣本，加入量均為100µL/孔（建議做復(fù)孔，防止跳孔出現(xiàn)）， 用封板膜封板，然后37℃靜置溫育1h。
3. 洗板：棄去孔中液體，用1×Buffer洗板3次（300µL/孔），在吸水紙上拍干孔中的殘留液體。（如采用手洗板，應(yīng)注意加1×Buffer洗板時(shí)需要懸空加液，槍頭最好不要碰到孔內(nèi)壁；每次加入Buffer后，靜置1min并輕微震蕩；拍干時(shí)注意每次換新的吸水紙或在紙上干凈的區(qū)域拍干）
4. 酶標(biāo)抗體溫育：按100µL/孔加入1×酶標(biāo)抗體， 封板膜封板， 37℃靜置溫育1h。
5. 洗板：同步驟3，其中洗板次數(shù)為5次。
6. 顯色：將預(yù)先配置好的底物液按100µL/孔加入酶標(biāo)板中，用封板膜封板， 37℃避光靜置溫育20min。
7. 終止：按100µL/孔加入終止液。
8. 讀數(shù)：在酶標(biāo)儀中測定雙波長450/630nm處的OD值，測定應(yīng)在終止后20min內(nèi)完成

結(jié)果處理：

以BSA標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（OD450nm-OD630nm）為因變量Y，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/mL）為自變量X繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，推薦使用四參數(shù)Logisitic 數(shù)學(xué)模型擬合方程： Y=((A-D)/(1+(x/C)^B))+D。將樣品OD值（OD450nm-OD630nm）代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式，計(jì)算樣品中BSA的含量。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：

實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果：

注意事項(xiàng)：

1. 測定BSA含量的容器應(yīng)專用，防止實(shí)驗(yàn)室中BSA污染。 

2. 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷。 

3. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用，試劑盒各組分使用前應(yīng)充分混勻。 

4. 嚴(yán)格遵守說明書的操作方法，必須使用本試劑盒配套的試劑，不可使用自制或其他試劑盒內(nèi)試劑，以保證準(zhǔn)確的檢測效果。 

5. 注意在不同樣本和步驟間及時(shí)更換加樣槽和吸頭，避免交叉污染。

6.最終的試驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、操作者的操作方法及試驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)。 

7.本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。 

8.本試劑盒內(nèi)終止液為酸溶液，操作時(shí)應(yīng)格外注意。 

9.所有生物樣本均具有潛在生物安全風(fēng)險(xiǎn)，使用者應(yīng)嚴(yán)格按照當(dāng)?shù)胤珊拖嚓P(guān)規(guī)定操作處理和丟棄樣本。

注意事項(xiàng)：

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效期保障：嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量，確保試劑效期新鮮，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

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