細(xì)胞培養(yǎng)的成功與否，很大程度上取決于試劑與耗材的選擇是否恰當(dāng)。面對琳瑯滿目的產(chǎn)品——DMEM、RPMI-1640、胎牛血清、胰酶、PBS、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶……新手往往感到困惑。本文將從培養(yǎng)基本試劑、消化與緩沖液、以及培養(yǎng)容器三個方面，為你系統(tǒng)梳理選擇指南，并澄清常見誤區(qū)。

一、培養(yǎng)基本試劑：培養(yǎng)基、血清與雙抗

1. 培養(yǎng)基
培養(yǎng)基為細(xì)胞提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)。常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是 DMEM（高糖型），適用于大部分腫瘤細(xì)胞（如HeLa、293T、HepG2）和成纖維細(xì)胞。但也有特殊細(xì)胞需要 RPMI-1640（如懸浮淋巴細(xì)胞）或 F-12（如原代細(xì)胞）。

l 選擇原則：以細(xì)胞庫（如ATCC）說明書為準(zhǔn)。如果沒有說明，DMEM可作為大多數(shù)貼壁細(xì)胞的起始選擇。

l 常規(guī)配方：90%基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10%胎牛血清 + 1%雙抗（青霉素/鏈霉素）。

l 酚紅：多數(shù)培養(yǎng)基含酚紅指示劑，用于監(jiān)測pH變化，但某些熒光實驗中需使用無酚紅培養(yǎng)基。

2. 血清（胎牛血清 FBS）
血清提供生長因子、激素和貼壁因子。

l 選擇建議：優(yōu)先購買胎牛血清，批次穩(wěn)定性好。進口品牌需注意正規(guī)渠道。

l 注意：血清需56℃滅活30分鐘（去除補體）？大多數(shù)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)無需滅活，過度加熱會破壞生長因子。除非說明書特別要求。

3. 雙抗（青霉素-鏈霉素）

l 作用：防治細(xì)菌污染。

l 使用建議：新手建議加入1%雙抗。但長期培養(yǎng)原代細(xì)胞或進行轉(zhuǎn)染實驗時，有時使用無抗培養(yǎng)基以降低細(xì)胞應(yīng)激。

二、消化液與緩沖液：胰酶和 PBS

1. 胰蛋白酶
貼壁細(xì)胞傳代必-備。常用濃度為 0.25% 胰酶 + EDTA。

l 作用：胰酶切割細(xì)胞間黏附蛋白和細(xì)胞與培養(yǎng)皿結(jié)合蛋白；EDTA螯合鈣鎂離子，輔助消化。

l 使用技巧：

1. 消化前用PBS洗滌細(xì)胞（去除血清，避免抑制胰酶）。

2. 消化時間因細(xì)胞而異：HEK293T約1分鐘，HeLa約2-3分鐘，原代成纖維細(xì)胞可能需要5分鐘以上。

3. 終止：加入等量含血清培養(yǎng)基即可。

l 選購：可選擇含酚紅的胰酶（便于觀察是否吸走細(xì)胞），或無酚紅版（某些檢測實驗需要）。

2. PBS（磷酸鹽緩沖液）

l 配方：無鈣鎂 PBS（關(guān)鍵區(qū)別）。含鈣鎂的PBS會促進細(xì)胞黏附，不適用于細(xì)胞洗滌。

l 用途：

1. 洗滌細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)基中的血清和代謝廢物。

2. 稀釋細(xì)胞懸液。

3. 作為免疫熒光實驗中的洗滌液。

l 選購注意：商品化PBS有1×和10×濃縮液，購買時注意倍數(shù)。也可自配，但需無菌過濾。

三、培養(yǎng)容器：培養(yǎng)皿 vs 培養(yǎng)瓶及其他耗材

1. 培養(yǎng)皿

l 特點：平底、敞口、透明。

l 優(yōu)點：

1. 操作方便，移液槍/細(xì)胞刮刀可任意角度進入。

2. 視野無變形，適合顯微觀察、相差拍照。

3. 適合多組平行實驗、細(xì)胞劃痕、克隆形成等。

l 缺點：敞口易污染，需小心操作；培養(yǎng)基蒸發(fā)較快。

l 常用規(guī)格：35 mm、60 mm、100 mm（以直徑計）。

2. 培養(yǎng)瓶

l 特點：立式瓶身，密封或透氣蓋。

l 優(yōu)點：

1. 氣體交換可控（旋松透氣蓋即可），污染風(fēng)險低。

2. 節(jié)省培養(yǎng)基用量（一個T25瓶底面積25 cm2，只需5-6 mL培養(yǎng)基）。

3. 適合長期擴增保種。

l 缺點：瓶口較小，操作稍不便；觀察時需調(diào)整角度。

l 常用規(guī)格：T25（底面積25 cm2）、T75、T175。

3. 材質(zhì)與表面處理
無論培養(yǎng)皿還是培養(yǎng)瓶，主流材質(zhì)均為聚苯乙烯（PS）。

l TC處理（組織培養(yǎng)處理）：通過等離子或化學(xué)處理使表面帶負(fù)電荷，親水，貼壁細(xì)胞才能黏附。

l 懸浮培養(yǎng)：使用未TC處理的低吸附皿（如細(xì)菌培養(yǎng)皿），或特殊超低吸附表面。

4. 其他耗材

l 移液管：1 mL、5 mL、10 mL、25 mL等，一次性無菌獨立包裝。

l 離心管：15 mL和50 mL，用于收集細(xì)胞、離心。選擇錐形底、帶刻度、無菌。

l 凍存管：1.5-2.0 mL，內(nèi)旋蓋或外旋蓋，耐-196℃液氮。

四、選購避坑指南

五、總結(jié)快速選型表

掌握以上試劑耗材的選擇原則，你就能搭建一個穩(wěn)定、高效的細(xì)胞培養(yǎng)體系，避免因選錯耗材而導(dǎo)致的失敗。

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